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蒸汽灭菌器在幽门螺杆菌培养结果的使用

返回列表 来源:未知 发布日期:2019-09-16 10:06【

幽门螺杆菌是胃炎、消化性溃疡和胃癌的重要致病因子。目前,临床对幽门螺杆菌感染治疗大多是经验用药,随着感染人群中幽门螺杆菌耐药菌株的 不断增加,经验性用药治疗失败率越来越高。为指导 Ⅰ期临床用药,提高幽门螺杆菌治疗精准性、敏感性, 迫切需要实验室提供幽门螺杆菌培养和药敏 结 果。 由于幽门螺杆菌需要在微需氧的特殊环境和较高营 养条件生长,实验室培养成功率较低,使得许多医院 都不愿开展幽门螺杆菌培养。近几年来国内许多第 三方医学检验机构针对临床需求,纷纷开展幽门螺杆 菌培养和差异化服务。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

1.1.1 培养液种类

幽门螺杆菌转运培养基(固-液 双相)购自珠海经济特区益民生物工程制品厂(批号: 20180730);血琼脂平板购自郑州安图生物工程股份 有限公司(批号:20180726B);苛养菌药敏琼脂平板购 自 郑 州 安 图 生 物 工 程 股 份 有 限 公 司 (批 号: 20180719B)。

1.1.2 鉴定试剂

VITEK MS-CHCA 基质购自生 物梅里埃公司(批号:1006062980);尿素酶购自杭州 滨和微生物试剂有限公司(批号:170103);触酶和氧 化酶购自重庆庞通医疗器械有限公司(批号分别为: 18D0804和18D1805)。

1.1.3 仪器

梅里埃质谱仪 VITEK MS购自生物 梅里埃公司;TDR-Y100型微需氧培养仪和微需氧培 养气体(10%二氧化碳+10%氢气+氮气平衡气)购 自湖南长沙天地人生物科技有限公司;标本运输箱购 自广州赛信冷链冷藏科技有限公司;
博迅YXQ-75SII立式压力蒸汽灭菌器(非医用); HSX-250型电热恒温恒湿箱购自中仪国科(北京)科 技有限公司;DW-86L338型-80 ℃超低温保存箱购 自青 岛 海 尔 特 种 电 器 有 限 公 司;DW-YW166A 型 -25 ℃冰箱购自中科美菱低温科技有限责任公司; DW-YL450型4 ℃冰箱购自中科美菱低温科技有限 责任公司;BSC-1500IIB2-X型生物安全柜购自山东济 南鑫贝西生物技术有限公司;CX21FS1C 型生物显微 镜和 BX43F型摄像显微镜购自日本奥林巴斯公司。

1.2 方法

1.2.1 样本制备原代幽门螺杆菌标准菌株

ATCC43504以 TSB基质配制浓度为0.5麦氏浊度的 菌悬浮液(约1×108 CFU/mL)。按以下步骤进行连 续稀释,(1)1∶00稀释:吸取上述细菌悬液0.1 mL 加入9.9mLTSB中。(2)再1∶100稀释:吸经(1)稀 释后悬液0.1mL 加入9.9mL TSB 中。(3)再1∶ 100稀释:吸经(2)稀释后悬液0.1mL 加入9.9mL TSB中。此 时 幽 门 螺 杆 菌 浓 度 为 (100±10)CFU/ mL,然后将此浓度的幽门螺杆菌菌液加入运输培养 基中,每支1mL,共75支。此试验重复3次。

1.2.2 样本包装

将标本放置于特殊包装箱中。包 装箱必须具备,
(1)主容器用足量的吸附性材料进行 包裹,以便在发生渗漏时可以吸收所有液体。
(2)中 层包装,为第2层耐用、水密性、防渗漏的包装,把主 容器装入其中并对其起保护作用。
(3)外包装,中层 包装置于外包装内,并加垫适宜的缓冲材料。外包装 应能保护其内容物在运输时不受外界的影响,如遭受 物理性损坏。外层容器的最小一面的尺寸≥10cm× 10cm。将制备完成的样本放置于特殊包装箱中进行 相关贮存试验。

1.2.3 样本贮存

把已接种菌液的幽门螺杆菌运输 培养基分别置于4、25、35、-25、-80 ℃环境中,分别 存放6.0、12.0、24.0、48.0h后进行微需氧培养。

1.2.4 样本的运输

汽车运输:将标本置于4 ℃冷 链运输箱由本公司冷链运输车运送至杭州金域医学 检验所样本接收组,并及时递交至微生物室,所有样 本存放总时间为7.0h后接种。在车上时间为6.0h。 火车运输:将标本置于4 ℃冷链运输箱,通过安检并 进行交接登记。当日上午约9:00从杭州托远,至下 午15:00左右样本到达广州高铁站,由广州运务组提 货,在16:00前交接进入广州金域标本组并及时递交 至微生物室,所有样本存放总时间为7.0h后接种,在 车上时间约为6.0h。飞机运输:将标本置于4 ℃冷 链运输箱,通过安检并进行交接登记,由杭州经航空 运送到达广州白云机场,并及时递交至微生物室,所 有样本存放总时间为7.0h后接种。在空中时间约为 2.5h。

2 结  果

固体培养到第3天时,幽门螺杆 菌生长良好,哥伦比亚血琼脂平板上见透明、针尖样 菌落形态;液体培养第3天时可见培养基明显浑浊, 涂抹少量菌液于无抗菌药物的哥伦比亚血琼脂平板 培养,肉眼未见污染菌生长,并有透明、针尖样的菌落长出;在无菌生理盐水中:革兰染色后细菌为革兰阴 性,固体培养基中的幽门螺杆菌为螺旋状、海鸥状、s 状弯曲菌或短杆菌;液体培养基中的幽门螺杆菌则多 为螺旋短杆状,亦见部分长丝状细菌,有的互相缠绕 聚集成团,有的散在分布,革兰染色结果见图1

样本贮存温度与存放时间对结果有非常显著性影 响。在24.0h内相同贮存时间以贮存4 ℃时培养阳 性率最高(40.4%±5.1%),与其他各组比较差异有 统计学意义 (P<0.05);在 贮 存 6.0h 以 内 以 贮 存 25 ℃时阳性率最高(71.2% ±8.1%),与 35、-25、 -80 ℃比较,差异有统计学意义(P<0.05)。不同贮 存时间以-80 ℃结果最稳定,结果见表1。

3 讨  论   

幽门螺杆菌为革兰染色阴性无芽胞、呈螺旋状弯 曲的杆菌,不仅寄生于胃肠道,而且在口腔及呼吸系 统均分离到细菌,在人群中感染率达50%以上。据报 道,幽门螺杆菌感染是消化系统慢性炎症、胃部溃疡、 胃黏膜淋巴组织异常和淋巴瘤的主要致病菌和胃癌 的一级致癌因子。目前对幽门螺杆菌感染诊断方法种类众多,不同方法检出的阳性率差异明显,有许 多确定性方法如病理检查、基因诊断等。但如果进 行致病机制、细菌分型、耐药菌株、疫苗制备等研究, 幽门螺杆菌培养法是“金标准”。




 


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