浅谈小叶三点金提取物的抗炎作用！

小叶三点金为豆科山蚂蝗属植物小叶三点金草 [Dcsmodium microphyllum（Thunb.）DC.]，别名“斑鸠窝” “爬地香”“哮灵草”“小叶山绿豆”“辫子草”“碎米柴”等， 以其根及全草入药 。小叶三点金在民间常用于治疗 尿路感染、糖尿病、泌尿系结石、慢性胃炎、慢性气管炎 等病症，具有清热解毒、健脾利湿、消炎止血、止咳平喘、活血化瘀等功效，也被广泛用于治疗毒蛇咬伤、痈疮溃 烂、漆疮、痔疮等 。

1 材料

1.1 仪器

GL124-1SCN 型电子天平[赛多利斯科学仪器（北 京）有限公司]；UV-1780 型紫外-可见分光光度计[岛津 仪器（苏州）有限公司]；TGL-16GB型离心机（上海安亭 科学仪器厂）；全波长型酶标仪[帝肯（上海）贸易有限公 司]；BXM-30R型立式压力蒸汽灭菌器（上海迅博实业有限公司医疗设备厂）；RE-1002型旋转蒸发仪（常州市国 旺仪器制造有限公司）。

1.2 药品与试剂

醋酸地塞米松片（浙江仙琚制药股份有限公司，批 号：180119，规格：0.70 mg）；头孢克肟分散片（浙江莎普 爱思药业股份有限公司，批号：180162E，规格：50 mg）； 二甲苯、冰醋酸、伊文思蓝（国药集团化学试剂有限公 司，批号分别为F20180618、T20180912、20180725）；角叉 菜胶（上海源叶生物科技有限公司，批号：YY18704）；水 合氯醛（成都市科龙化工试剂厂，批号：2018020102）；超 氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）酶 联 免 疫 吸 附（ELISA）检 测 试 剂 盒（批 号 分 别 为 20180308、20180305、20180316）均购自南京建成生物工 程研究所；其余试剂均为分析纯或由实验室自行配制； 生理盐水为0.9％氯化钠注射液，水为纯化水。

1.3 药材

小叶三点金药材采自广西南宁市上林县，经广西中 医药大学药学院陈勇教授鉴定为豆科山蚂蝗属植物小 叶 三 点 金 草 [Dcsmodium microphyllum（Thunb.）DC.] 全草。 1.4 动物 清洁级昆明种小鼠，雄性，体质量18～22 g，由广西 医科大学实验动物中心提供，动物生产许可证号：SCXK 桂2014-0001。小鼠在实验前于清洁级动物房适应性喂 养3 d，环境温度为（25±1）℃、湿度约为65％、人造光周期为12 h明暗交替。小鼠自由摄食饮水，饲料为标准啮 齿类动物饲料，饮水为纯化水。动物饲料、垫料均由广 西医科大学实验动物中心提供。

2 方法

参考方法进行小叶三点金提取物的抗炎活 性作用考察。

2.1 小叶三点金提取物的制备

取小叶三点金药材 5 kg，打成粗粉，以 70％乙醇在 约82 ℃条件下回流提取3次，每次溶剂倍量分别为12、 8、6倍（L/kg），提取时间分别为2、1.5、1 h；滤过，合并滤 液，用旋转蒸发仪在水浴条件下减压浓缩，然后于55 ℃ 水浴中挥干溶剂，称定质量，得率为12.85％。

2.2 二甲苯致小鼠耳肿胀实验

取小鼠60只，按体质量随机分为空白组、阳性对照 组（地塞米松，0.005 g/kg；剂量根据人给药剂量换算并结 合预实验结果制定）和小叶三点金提取物高、中、低剂量 组（50、30、15 g/kg，以所含原生药量计算，下同；剂量根 据急性毒性实验与预实验结果制定），每组12只。各给药 组小鼠分别灌胃给药（分别将地塞米松片和小叶三点金 提取物以水配制成相应药液），给药体积均为20 mL/kg， qd，连续给药7 d；空白组小鼠同法灌胃等体积水。末次 给药1 h后，于小鼠右耳正反两面各涂抹二甲苯10 μL致 炎（剂量根据预实验结果设定）；15 min后脱颈椎处死小 鼠，沿耳根部剪下两耳，用6 mm打孔器在两耳相同部位 打下等面积圆耳片，称定质量，计算耳肿胀度及肿胀抑 制率。耳肿胀度（mg）＝右耳片质量－左耳片质量；耳肿 胀抑制率（％）＝（[ 空白组平均耳肿胀度－实验组平均 耳肿胀度）/空白组平均耳肿胀度]×100％。

2.3 冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加实验

取小鼠60只，按“2.2”项下方法分组、给药。末次给 药 1 h 后，对各组小鼠尾静脉注射 0.3％伊文思蓝溶液 10 mL/kg、腹腔注射0.6％冰醋酸溶液10 mL/kg致炎（剂 量根据预实验结果设定）；15 min后脱颈椎处死小鼠，腹 腔注射生理盐水6 mL冲洗腹腔，轻揉其腹部1 min后， 剪开腹腔收集腹腔液；腹腔液以 3 000 r/min 离心 12 min，取上清液，采用紫外-可见分光光度计于590 nm波 长处测定光密度（OD）。以OD值表示毛细血管通透性， OD值越高则毛细血管通透性越大。

2.4 角叉菜胶致小鼠足肿胀实验

取小鼠60只，按“2.2”项下方法分组、给药。末次给 药1 h后，在各组小鼠右后足趾部皮下注射1％角叉菜胶 溶液0.02 mL致炎（剂量根据文献[11]设定）；15 min后脱 颈椎处死小鼠，剪取其后双足趾相同部位，称定质量，计 算小鼠足肿胀度及肿胀抑制率。足肿胀度（mg）＝小鼠 右后足趾质量－小鼠左后足趾质量；足肿胀抑制率（％）＝（[ 空白组平均足肿胀度－实验组平均足肿胀度）/ 空白组平均足肿胀度]×100％。

3 结果

与空白组比较，阳性对照组和小叶三点金提取物 高、中剂量组小鼠耳肿胀度均显著降低，耳肿胀抑制率 均显著升高，差异均有统计学意义（P＜0.05 或 P＜ 0.01）；与阳性对照组比较，小叶三点金提取物低剂量组 小鼠耳肿胀度显著增高，耳肿胀抑制率显著降低，差异 均有统计学意义（P＜0.05），而小叶三点金提取物高、中 剂量组小鼠耳肿胀度及肿胀抑制率差异均无统计学意 义（P＞0.05）。与空白组比较，阳性对照组和小叶三点金提取物各 剂量组小鼠腹腔毛细血管通透性均显著增加，差异均有 统计学意义（P＜0.05 或 P＜0.01）；与阳性对照组比较， 小叶三点金提取物各剂量组小鼠腹腔毛细血管通透性差异无统计学意义（P＞0.05）。与空白组比较，阳性对照组和小叶三点 金提取物高、中剂量组肾上腺摘除小鼠足肿胀度均显著 降低，足肿胀抑制率显著升高，差异均有统计学意义 （P＜0.05 或 P＜0.01）；与阳性对照组比较，小叶三点金 提取物低剂量组肾上腺摘除小鼠足肿胀度显著增高，足 肿胀抑制率显著降低，差异均有统计学意义（P＜0.05）， 而小叶三点金提取物高、中剂量组肾上腺摘除小鼠足肿 胀度及肿胀抑制率差异均无统计学意义（P＞0.05），

4 讨论

中药以其种类繁多、成分复杂多样、药理作用广泛、 毒副作用少等特点成为抗炎药物研究的首选对象。炎 症通常会改变机体的正常生理指标，诱发多种急、慢性 炎症疾病，并使含血管系统的生物机体产生复制的防 御反应。目前，临床治疗抗炎药物是仅次于抗感染 药物的第二大类药物，除肾上腺皮质激素类与非甾体类 抗炎药物以外，还涉及部分中药，应用较为广泛。许 多清热解毒及抗凝血化瘀中药具有抗炎、改善血液循环 功能，其在防治急慢性炎症、腹腔感染性疾病等方面具 有明显疗效。实验研究证实，中药的抗炎作用机制 具多途径作用的特点，主要包括影响下丘脑-垂体-肾上 腺皮质轴（HPAA）系统功能、抑制花生四烯酸代谢、干扰 炎症细胞、抗血栓生成、清除氧自由基等方面，与现代药 理学炎症机制研究相对应，其研究和开发价值越来越受 到学者的重视。