霉菌培养箱在药制剂妇科洗的体外抑菌作用的使

近年来，随着抗菌药物的广泛应用，使耐药细菌不断增 加，其耐药性也随之增强，导致感染性疾病例数增多，严重 威胁到人类的生命健康，许多天然药物具有抗病、低毒、不 易产生耐药性等特点与优势，开展中药抗菌的应用和研究， 对于细菌性疾病的防治具有重要意义。妇科洗是我院根据 临床验方研制的中药制剂，主要由苦参、苦树皮、千里光、 银花藤、鱼腥草、野菊花、关黄柏、蛇床子等中药组成。有 抗菌、消炎的作用，具较好的临床疗效。本实验通过测定妇 科洗对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，S.aureus）、 大 肠 埃 希 菌（ Escherichia col，E.coli）、 白 色 念 珠 菌（ Candida albicans，C.albicans）的 MIC 和 MBC，分析妇科 洗对不同菌株的最低抑菌浓度，进行抑菌效果评价，研究中 药方剂对常见的阴道炎致病菌的体外抑菌活性，为临床应用 提供科学依据。

标准菌：金黄色葡萄球菌（ATCC25923）、 大肠埃希菌（ATCC25922）、白色念珠菌，由广西柳州市中 医医院微生物室分离鉴定。

妇科洗制剂（柳州市中医医院制剂室，批准 文号：桂药制字 Z02060095，批号：20160811）；氯化三苯四氮唑（triphenyltetrazoliumchloride，TTC，中国华东师范大 学化工厂，批号：20101026）；无水乙醇（成都市科龙化工试 剂厂，批号：2016042801）；氯化钠注射液（浙江国镜药业有 限公司，批号 :C116080303）；沙氏葡萄糖琼脂培养基（广东 环凯微生物科技有限公司，批号：3104864）；沙氏葡萄糖液体 培养基（广东环凯微生物科技有限公司，批号：3104833）；营 养琼脂（广东环凯微生物科技有限公司，批号：3103446）；营 养肉汤（广东环凯微生物科技有限公司，批号 ：3103278）。

DH64 型电热恒温干燥箱（上海市跃进医疗器械一厂），DNP-9162BS-III 型电热恒温培养箱（上海市新苗医疗器械有限公司），MJX-100B-2 型霉菌培养箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂），JA5003N 电子天平（上海精密科学仪器有限公司）。

取妇科洗 1 瓶（344 mg/mL），文火浓缩 至 86 mL，此时得到药液浓度为 1000 mg/mL，对药液进行 灭菌备用。在无菌条件下，将妇科洗药液用孔径 0.22 um 无 菌滤头过滤除菌，用生理盐水按照倍比稀释法将药液稀释成 1000 mg/mL、500 mg/mL、250 mg/mL、125 mg/mL、 62.5 mg/mL、31.25 mg/mL、15.625 mg/mL、7.813 mg/ mL、3.906 mg/mL、1.953 mg/mL 的浓度梯度。

用接种环分别取金黄色葡萄球菌、大 肠埃希菌、白色念珠菌菌落，用 0.9% 的生理盐水校正浓度至 0.5 麦氏比浊标准，再用营养肉汤（金葡菌、大肠菌）或沙氏 葡萄糖液体培养基（白念）以 1:100 倍数稀释备用（含菌量约 106CFU· mL-1）。

参考美国临床试验室标准委员会 （CLSI）所公布的标准 （CLSI，2007），采用微量稀释法 测定各样品对不同菌株的 MIC 值。用微量加样器分别取各个 浓度的药液 50μl，依次由低到高浓度加到 96 孔板中并做好 标记。再取 50μl 的各个菌液加入到 96 孔板中，使每孔接种 菌量约 5×105CFU·mL-1 个菌。同时每个实验菌组设无菌对 照组和无药对照组。无菌对照孔内加 100 μl 营养肉汤，其中 白色念珠菌组加沙氏葡萄糖液体培养基；无药对照孔内只加 50 μl 营养肉汤和 50 μl 菌液。将 96 孔板振荡 1 分钟，使孔 内菌液与药液混匀后用封口胶密封好，置于 35℃的恒温培养 箱孵育（白色念珠菌组于 25℃恒温培养箱孵育）。24 小时后， 每孔加入 1% 氯化三苯四氮唑（TTC）5 μl，在恒温箱内孵 育 3 小时后取出观察各孔颜色变化，有细菌生长孔显红色， 不显红色的最低药物浓度为最低抑菌浓度（MIC）。观察药 物 MIC 以上未见细菌生长的各孔，用移液枪移取 50 μl 至不 含药物的营养琼脂培养皿中，白色念珠菌移种至沙氏葡萄糖 琼脂培养皿，分别置于 35℃和 25℃的培养箱内孵育。24 小 时后观察培养皿上有无细菌生长，计数少于 5 个菌落的为该 药的最低杀菌浓度（MBC）。

本实验结果表明，妇科洗药液对白色念珠菌表现出较 好的抗菌活性，妇科洗从药性理论上来看，组方药材性味苦 寒，归膀胱经，与肾相表里，功效抗菌、消炎。用于妇科各 种炎症，即妇科洗的药效作用部位在阴道，阴道炎常见致病 菌为白色念珠菌，抑菌试验结果与临床辨证归经理论相一 致。与西药或抗菌药物相比，中药可辨证论治，疗效稳定且 较好、副作用极少，患者易接受。恢复正常的阴道微生物生 态环境是治愈阴道病的根本，中药对阴道炎的治疗恰好从这 个目的出发。 本实验采用三种常见的菌株进行实验，菌株存在局限性， 对细菌、真菌的抑制作用不全面，另妇科洗药液为中药组方， 下一步将对抑菌活性成分进行分离纯化，明确抑菌的物质基 础，扩大中药的临床药效价值，对开发民间中药资源的临床 应用提供参考。 阴道炎是困扰女性身体健康的主要疾病之一，属祖国医 学“阴痒”、“带下病”的范畴。临床西药治疗以抗菌药物、 抗真菌治疗为主，随着细菌、真菌耐药情况越来越严峻，临 床可选择的抗菌药物越来越少，而且存在用药周期长、肝功 能损害、复发率高等弊端。抗菌中草药的研究，尤其是清热 燥湿中药已成为近年来该领域的研究热点。我院妇科洗不仅 对白色念珠菌、金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌具有良好的抑 菌效果，对皮肤温和、无毒无刺激，且具有一定的消炎、镇 痛作用，适用于妇科疾病预防及治疗，具有良好的市场应用 和开发价值。



 

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