Ⅱ级生物安全柜人员、产品和交叉污染保护测试

依据JJF1815-2020《Ⅱ级生物安全柜校准规 范》，人员、产品和交叉污染保护测试采用微生物 法或碘化钾法，仲裁时用微生物法。人员、产品和 交叉污染保护项目，此三个校准项目的操作方式相 似，其中人员保护项目是生物安全柜的校准中难度 较大的项目，操作较为繁琐复杂。下面以其中最受 关注的人员保护项目为例进行测试方法说明。

1.  人员保护的微生物法测试 微生物法是将已经配制完成的不同浓度枯草 芽孢杆菌菌液以喷雾器主动释放，由碰撞采样器和 狭缝采样器进行收集，磷酸盐缓冲液和营养琼脂培养皿充当载体的方式，对安全柜人员、产品和交叉 污染保护进行检测的实验方法。作为JJF1815-2020 《Ⅱ级生物安全柜校准规范》的仲裁检验方法以及 NSF49中唯一承认的检验方法，微生物法科学、准 确、有效。 在试验开始前安全柜启动并运行至少30min， 并连续运行至所有测试完成。将安全柜气流流速设 置为标称值，使其处于正常工作状态下。

 2. 试验仪器分布设置 将盛有55mL浓度为5×108CFU/mL～8×108CFU/ mL枯草芽孢杆菌芽孢计数标准物质（或粘质沙雷 氏菌标准物质）菌液的喷雾器置于安全柜内，距左 右两侧壁距离相等，喷雾器喷射轴在工作台面上方 360mm处，喷嘴前端距前窗操口内侧100mm，且正对 前窗操作口，如图4所示。 干扰圆筒置于安全柜中央，且中心轴在工作台 面上方70mm，圆筒一端紧靠安全柜后壁，另一端 应伸出安全柜前窗操作口至少150mm。被检安全 柜前共放置6个左右对称的撞击采样器，分别盛有 20mL的无菌稀释液，且采样口正对安全柜。其中 圆筒周围设4个撞击采样器，它们的采样口前端距 安全柜63mm。其中，两个撞击采样器的采样口轴 线相距150mm，与圆筒上沿平齐；两个撞击采样器 采样口轴线相距50mm，位于距圆筒下沿30mm的水 平面上。另两个撞击采样器的采样口前端距安全柜 50mm，采样口轴线相距300mm，采样口位于工作台 面上360mm处的水平面上。 设置两个狭缝采样器，其采样平面与安全柜 工作台面平齐，采样口的垂直轴线在安全柜前方 150 m m处，两个 狭缝采样器距离左右侧壁均为 200mm。当安全柜标称宽度小于90cm时，设置两个 狭缝采样器，其采样平面与安全柜工作台面平齐， 采样口的垂直轴线在安全柜前方150mm处，两个狭 缝采样器距离左右侧壁均为50mm。设置两个狭缝 采样器，采样口位于工作台面上360mm处的水平面 上，采样口的垂直轴线在安全柜前方50mm处，两个撞击采样器的采样口轴线相距150mm，如图2所示。 取一个作为对照的培养皿放置在圆筒中心轴下方， 且位于前窗进气格栅上方或下方10mm处，使其对 进气气流干扰最小。

3. 试验步骤 试验需重复进行3次，每次30分钟，试验顺序 如表1所示

依据JJF1815-2020《Ⅱ级生物安全柜校准规 范》，将采集的滤膜在无菌条件下封入培养皿中，在 37℃下培养24～48h后进行微生物计数。由于该方 法需要更高的操作和设备要求，且需耗时数天才能 得到结果，无法当场验证，因此日常校准中常采用 碘化钾法。